Validación del método analítico para la determinación de N-acetil-DL-triptófano en muestras de albúmina por cromatografía líquida de alta resolución

Abstract

La Albúmina Humana al 20% es una solución acuosa estéril obtenida por fraccionamiento del plasma sanguíneo conetanol. Esta solución es osmóticamente equivalente a aproximadamente 400 mL de plasma normal y no contienepreservativos. Este producto está indicado a pacientes que cursan con hipoalbuminemia (<2,5g/dL) como resultadode quemaduras, hemorragias severas, sepsis, cualquier condición de choque o colapso, pacientes hemodializadoscon hipotensión que tienen sobrecarga de líquidos y no pueden tolerar soluciones salinas, síndrome nefrótico, hipoalbuminemiapor lesión hepática severa, pancreatitis necrotizante. El proceso productivo de la Albúmina Humana al20% incluye dos pasos de pasteurización a 60 °C por 4 y 10 horas, respectivamente. En el primer paso es necesarioañadir dos estabilizantes térmicos, N-acetil- DL-triptófano y caprilato de sodio, para evitar la desnaturalización de laproteína. En el presente trabajo se reporta la validación del método analítico utilizado para la determinación de Nacetil-DL-triptófano en muestras de albúmina humana en producto terminado y en proceso por HPLC. Para garantizarla confiabilidad de los resultados analíticos se calificó el equipo de HPLC utilizado, evaluándose su calibración, exactitudde la longitud de onda y linealidad del detector así como la exactitud del flujo, y las pruebas de gradiente de labomba del sistema, confirmándose que el mismo operó consistentemente de acuerdo a sus especificaciones de diseño.Los parámetros encontrados en el estudio de la validación fueron: especificidad: no se encontraron interferenciaspor parte de la matriz de la muestra; adecuación del sistema: se obtuvo un promedio en número de platos teóricosde 8684 con un factor de asimetría promedio de 1,91; linealidad: ecuación de regresión lineal igual a8x106X+6190,6 (r2=0,9986). En cuanto a la precisión, los valores de repetibilidad encontrados para el analista 1 fueronde 0,32% y para el analista 2 de 0,17%, con un promedio de precisión intermedia de 0,25 en términos de des -viación estándar relativa. Para el parámetro exactitud, el promedio de los valores de porcentajes de recuperación fuede 99,87 con una desviación estándar relativa de 0,95%. El parámetro robustez fue evaluado utilizando el diseño factorialde Plackett-Burman para los factores pH, flujo y concentración de sales de la fase móvil y con estos resultadosse consideró validado el método analítico estudiado