Estandarización de PCR múltiple para identificación simultánea de los patógenos E. coli, S. aureus y L. monocytogenes en queso blanco

Abstract

La técnica de PCR múltiple (mPCR) constituye una alternativa rápida y específica para la identificación y la detección de agentes etiológicos y de sus genotipos de virulencia y resistencia, con gran sensibilidad y rapidez. Esta técnica forma parte de las herramientas analíticas que permiten la identificación de los patógenos transmitidos por los alimentos, siendo alternativas económicas, seguras y confiables para su aplicación en la industria alimentaria y los laboratorios de control. El objetivo fue estandarizar un método de PCR múltiple para identificar simultáneamente, en una misma mezcla de reacción, las bacterias
patógenas Escherichia coli (E. coli), Staphylococcus aureus (S. aureus) y Listeria monocytogenes (L. monocytogenes) en una matriz de queso contaminada artificialmente y posteriormente enriquecida en agua peptonada. La dilución que reportó entre 10 y 250 UFC, fue la seleccionada para realizar la extracción de ADN, siendo esta la dilución la de 1x10^-4. Las bandas de los cultivos puros y de la PCR múltiple fueron detectadas mediante electroforesis utilizando un transiluminador UV. La estandarización del método para la matriz de queso se realizó inoculando la matriz con los microorganismos de interés, Listeria monocytogenes, S. aureus y E. coli, y la presencia de éstos se determinó luego a través de la PCR múltiple.