Estandarización metodológica de la determinación inmunohistoquímica de la subunidad-1 del receptor N-metil-D- aspartato (NMDR-1) en las neuronas productoras de la hormona liberadora de las hormonas gonadotrofinas (GnRH) en el hipotálamo del ovejo

Abstract

Se estudió inmunohistoquimícamente la presencia de la subunidad-1 del receptor N-metil-D-aspartato (NmDAr-1) enneuronas productoras de la hormona liberadora de las hormonas gonadotroficas (gnrh) en muestras de hipotálamofijadas en parafina, provenientes de cinco ovejos no castrados. Se evaluaron diferentes condiciones para lasinmunoreacciones: sin y con recuperación antigénica (térmica y enzimática), diferentes diluciones de anticuerposprimarios (anti-NmDAr-1 y anti-gnrh), tiempos de incubación de anticuerpos y sistemas de amplificación y revelado.Se evaluó la recuperación térmica (recuperador Dako ph 6 y recuperador citrato ph 4) y la recuperación enzimática(incubación con tripsina). las diluciones de anticuerpos primarios fueron; 1/100 para anti-gnrh y 1/25 y 1/50para anti-NmDAr-1, respectivamente. los resultados se analizaron según una escala de cruces que estimó cualitativamentela intensidad del inmunomarcaje de los tejidos. Se seleccionaron la recuperación antigénica térmica concitrato, dilución 1/25 del anticuerpo anti-NmDAr-1 y tiempo de incubación de 12 h, como condiciones óptimas paralas inmunoreacciones con el anticuerpo anti-NmDAr-1. usando estas condiciones se detectó la presencia de laNmDAr-1 en membrana plasmática y citoplasma de las células reactivas de la región preóptica hipotalámica. para elanticuerpo anti-gnrh, hubo buen marcaje con dilución 1/100 del anticuerpo, sin recuperación antigénica e incubacióndurante 1 h y aplicación del sistema de revelado con peroxidasa. los resultados demuestran la posibilidad deusar muestras de tejido hipotalámico parafinado de ovinos para estudios inmunohistoquímicos del receptor NmDA.