Técnicas de inmunofluorescencia indirecta y microaglutinación en portaobjeto para el diagnóstico rápido de Ralstonia solanacearum Smith en tomate (Solanum lycopersicum L.)

Abstract

Ralstonia solanacearum es una bacteria patógena de las plantas ampliamente distribuida a nivel mundial. Es la
causante de la marchitez bacteriana, una de las principales enfermedades limitantes de la producción de solanáceas
en Venezuela. Para lograr un manejo eficiente del patógeno se hace necesaria su identificación rápida y precisa.
El objetivo de esta investigación fue ajustar el protocolo para la aplicación de las técnicas de inmunofluorescencia
indirecta y microaglutinación en portaobjeto que permitan el diagnóstico rápido e identificación en laboratorio
de R. solanacearum en plantas de tomate (Solanum lycopersicum L.). El antisuero a la bacteria fue obtenido
inmunizando con bacterias formalizadas, conejas de 2,5 kg y 2,5 meses de edad. Los antígenos utilizados para las
pruebas serológicas fueron cultivos bacterianos puros de 48 h de crecimiento y extractos de plantas enfermas, y los
controles, extractos de plantas sanas y bacterias patógenas de otros cultivos. Para la sensibilización de la técnica
de microaglutinación en portaobjeto se utilizó proteína A de Staphylococcus aureus. Los anticuerpos obtenidos
fueron específicos. Se determinó la sensibilidad y especificidad de los métodos. El límite de detección fue desde
104 a 108 UFC/mL para ambas técnicas. No se observó la presencia de reacciones cruzadas con otros géneros y
especies de bacterias estudiadas excepto con Pseudomonas syringae pv. tomato en la técnica de microaglutinación
en portaobjeto, pero una reacción fácilmente diferenciable a la del antígeno homólogo.