Determinación selectiva de Clorofila “a” en muestras acuáticas por fluorescencia molecular.

Abstract

Se desarrolló un método fluorométrico de determinación selectiva de la clorofila a, Clo a, en extractos de muestras de agua de mar, con un límite de detección de 1,8 g L-1. Se optimizó una metodología simple de extracción de los pigmentos fotosintéticos, utilizando un filtro de membrana de nylon de 13 mm de diámetro y tamaño de poro de 0,45 m, para la separación del fitoplancton. Para la extracción de los pigmentos se utilizó etanol. Se disminuyó el volumen de muestra (10 mL) y el volumen de extracción (1 mL) en función del tamaño de filtro utilizado. Este procedimiento se validó por el proceso de “spiking” sobre muestras de agua de mar. Se comparó la aplicación de modelos de calibración univariados y multivariados, PLS 1 y PLS2, en la determinación de la recuperación de Clo a en muestras “spiked”. En todos los casos se observa que el modelo de regresión de mínimos cuadrados parciales, PLS1 permitió incrementar la exactitud del análisis, obteniendo porcentajes de recuperación de Clo a cercanos al 100%. El modelo de calibración PLS2 para la determinación simultánea de Clo a y Clorofila b, Clo b, resulto ineficiente en la predicción de Clo a con un RMSEP del 50%. Este resultado esta acorde con lo reportado en la literatura de la sobre-estimación de la Clo a en presencia de la Clo b por métodos fluorométricos.