Obtención de antisuero contra el virus del mosaico sureño de la caraota mediante una metodología sencilla

Abstract

Hojas de caraota (50 g) infectadas con el virus fueron sometidas a procesos de homogeneización en una licuadora con 100 mL de buffer fosfato de potasio (BFP) 0,1 M; pH 7,5 y 1% de sulfito de sodio durante 5 min y filtración a través de gasa. El filtrado fue clarificado mediante adición de igual volumen de cloroformo/butanol (1:1), se emulsionó por 10 min y se centrifugó a 12.000 g por 15 min. El sobrenadante fue ajustado a una concentración de 0,125 M de cloruro de sodio y 6% de polietilenglicol 6000, se agitó durante 15 min y se dejó en reposo por igual tiempo. Seguidamente fue centrifugado a 12.000 g por 15 min, el sedimento resuspendido en 2 mL de BFP 0,001 M, pH 7,5 durante 30 min, y centrifugado a 12.000 g por 15 min. El sobrenadante (virus parcialmente purificado: VPP) fue utilizado para inmunizar un conejo, aplicándole cinco inyecciones intramusculares de 2 mL c/u (1 mL de VPP + 1 mL de adyuvante incompleto de Freund) cada seis días. El antisuero obtenido presentó un título de 1/1.024 en pruebas de doble difusión en agar (PDDA) y reaccionó levemente contra proteína de planta sana. Para eliminar los anticuerpos no específicos el antisuero fue absorbido con proteínas de planta sana. Posteriormente fue mezclado en proporción 1:1 con glicerol para su conservación. El antisuero absorbido permitió detectar fácilmente al virus en muestras procedentes del campo mediante PDDA. La obtención de antisuero mediante esta metodología puede ser de gran ayuda en el diagnóstico y estudios epidemiológicos de este virus, particularmente en laboratorios de escasos recursos