Ensayos de diagnósticos molecular de Trypanosoma equiperdum utilizando una enzima Taq polimerasa de producción nacional

Abstract

Resumen El Trypanosoma equiperdum es causante de una enfermedad de transmisión sexual entre équidos, llamada Durina, la cual posee una amplia distribución a nivel mundial. Es la única tripanosomosis que no se transmite a través de un insecto vector.Debido a que el T. equiperdum y el Trypanosoma evansi son indistinguibles a nivel morfológico, es pertinente realizar análisis de diagnóstico molecular que permitan diferenciar estos parásitos. Sin embargo, la no disponibilidad de divisas para la adquisición de insumos y reactivos de laboratorio en Venezuela, en particular, la enzima Taq Polimerasa importada, representa una gran limitante para la realización de ensayos de diagnóstico molecular. Por lo tanto, en este trabajo se propuso la utilización de una Taq Polimerasa nacional recombinante, expresada en E. coli, con la finalidad de estandarizar ensayos de PCR para T. equiperdum (cepa TeAp-N/D1). Se diseñaron cebadores basados en secuencias de cuatro genes del maxicírculo: nad5, cytb, cox1 y 12SrRNA, comprobando que TeAp-N/D1 ha retenido dichos fragmentos en su maxicírculo. Una vez estandarizado el ensayo, se empleó el par de cebadores basado en la secuencia del gen 12SrRNA del maxicírculo, que presentaron mayor sensibilidad y especificidad en el diagnóstico de T. equiperdum, para analizar un grupo de muestras de provenientes de una infección experimental en caballo, demostrando que la sensibilidad de la técnica de detección de este paraíso es elevada durante todo el curso de la infección. Palabras claves: TeAp-N/D1, maxicírculos, PCR, sensibilidad, especificidad.