Diseño de una prueba que permita detectar la presencia de δ- endotoxinas de Bacillus thuringiensis var. israelensis en un medio de cultivo

Abstract

Resumen Bacillus thuringiensis (Bt) es una bacteria que forma una inclusión parasporal conformada por δ-endotoxinas tóxicas para una gran variedad de insectos. Las formulaciones de Bt son ampliamente utilizadas en todo el mundo como una alternativa en el uso de pesticidas químicos ya que los cristales son altamente específicos, son inocuos para vertebrados y plantas, y son completamente biodegradables, lo que los hace una alternativa viable para el control de plagas de insectos. Bt. var. israelensis es específica para especies del género Aedes, Anopheles y Culex, dípteros que causa enfermedades tropicales como la malaria, el dengue, el chikungunya y el zika. Debido a la importancia económica de esta variedad, es necesario generar metodologías que nos permitan evaluar el proceso fermentativo y a su vez la formación del cristal. Por esta razón, el siguiente trabajo se planteó diseñar una prueba que permitiera detectar en medios de cultivo la proteína Cry11Aa, que conforma al cristal parasporal de Bt. var. israelensis mediante métodos inmunológicos. Para ello, la proteína Cry11Aa fue purificada a través del método de electroelución. Posteriormente, fue inyectada en conejos para obtener sueros hiperinmunes que fueron evaluados mediante un ELISAi, a fin de monitorear la respuesta de anticuerpos anti-Cry11Aa en función del tiempo. El seguimiento de la formación del cristal en un medio de cultivo, se realizó mediante un ensayo Dot Blot, resultando en un incremento progresivo en el reconocimiento de la proteína Cry11Aa hasta la fase estacionaria, lográndose así la estandarización de un método sencillo y reproducible para la detección de las δ-endotoxinas. Finalmente, se confirmó con un Western Blot que los anticuerpos generados reconocían sólo a la proteína Cry11Aa entre las diferentes proteínas que conforman al complejo espora-cristal de Bt. var. israelensis. Palabras claves: Bacillus thuringiensis var. israelensis, proteína Cry11Aa,ensayos inmunoquímicos,Dot Blot, control biológico.