Clonación, expresión y purificación de una proteína MASP de Trypanosomacruzi

Abstract

El proyecto genoma de Trypanosomacruzi reveló la existencia de la segunda familia más grande de genes de este parásito causante de la enfermedad de  Chagas: la familia MASP. Las proteínas MASP son antigénicas por lo que nos propusimos expresar y purificar una proteína MASP recombinante para una posterior caracterización inmunológica con sueros chagásicos venezolanos. Con este fin se realizó un despistaje inmunológico con sueros de pacientes chagásicos venezolanos, de una genoteca de genes MASP construida mediante amplificación por PCR con cebadores específicos de las regiones 5' y 3' conservadas y subsecuente clonación en el vector de expresión pT7-MAT-2, que contiene una etiqueta de histidinas. Luego de despistajes primario y secundario se seleccionó el clon CM82 que mostró un inserto completo de 400 pb. Se indujo la expresión de la proteína CM82 a partir de un cultivo de bacterias E. coli incubadas con IPTG durante 4 horas y se purificó la proteína recombinante por cromatografía de afinidad a metal inmovilizado. La electroforesis en gel de poliacrilamida-SDS, reveló una proteína purificada de aproximadamente 28 kDa. El ensayo de DOT- ELISA, usando una mezcla de suero de pacientes chagásicos, permitió verificar su antigenicidad.