Desarrollo de un método rápido mediante cromatografía de capa fina (CCF) que permita la cuantificación de metabolitos secundarios en extractos de plantas.

Abstract

El presente trabajo de investigación tuvo como objetivo desarrollar un método rápido y sencillo mediante cromatografía de capa fina que permita la cuantificación de metabolitos secundarios presentes en extractos de plantas. Para ello, se seleccionaron tres plantas que presentaran uno o varios metabolitos secundarios como marcadores quimiotaxonómicos y que, adicionalmente, se contase con un patrón puro para su comparación y cuantificación. Estas plantas fueron: raíces de Hydrastis canadensis, frutos de Crataegus oxycantha y raíces de Echinacea purpurea; los metabolitos secundarios estudiados fueron el alcaloide protoberberínico, berberina para la primera y el flavonoide glicosilado rutina para las dos últimas. La metodología para la cuantificación de estos compuestos se basó en colocar soluciones metanólicas de concentraciones conocidas de los extractos de plantas y patrones en placas de silica gel para CCF con indicador de fluorescencia. Luego, se desarrolló cada placa utilizando como fase móvil, la mezcla de solventes más idónea que permitiese la identificación del metabolito a ser cuantificado. La detección se realizó con luz UV a 254nm a través de fotografías con una cámara digital, la cual se mantuvo a una distancia de 8cm durante todo el experimento. Estas imágenes se descargaron en una computadora y se analizaron con un programa denominado en este trabajo como UCV-software (se denomina así por razones de simplicidad, debido a que aún no posee nombre) elaborado por el Laboratorio de Espectroscopía Láser de la Escuela de Química de la Universidad Central de Venezuela, a través del programa MATLAB 7.5.0., el cual genera densitogramas que permiten relacionar la densidad óptica en cada mancha en la placa con la concentración relativa de un determinado compuesto en el extracto; esto se relaciona con curvas de calibración del patrón puro del compuesto que se desea cuantificar. Los resultados indicaron que Hydrastis canadensis posee una concentración de 4,23±0,09 - 4,98±0,20 % de berberina, Crataegus oxycantha de 0,75±0,02 - 0,79±0,03 % de rutina y Echinacea purpurea 0,44±0,03 - 0,52±0,02% de rutina. Además, el método mostró ser preciso (%CV<5%), exacto (%Recuperación=96,63-105,58%) y lineal (R2>0,99); con limites de detección de 27,65 -75,58 ng, 55,74 - 152,92ng y 59,26 - 102,75ng; y de cuantificación de 92,16 - 251,94 ng, 185,79- 509,74ng y 197,55 - 342,51ng, para berberina en Hydrastis canadensis y rutina en Crataegus oxycantha y Echinacea purpurea, respectivamente. Por otra parte, el método resulto ser simple, económico y rápido, en comparación con otras técnicas cromatográficas y permite la evaluación de flavonoides y alcaloides en muestras de plantas, con posibles aplicaciones en análisis de otros metabolitos o compuestos.