Estudio de la Actividad Serín-Proteasa en la fracción soluble de promastigotes de Leptomonas sp.

Abstract

En parásitos protozoarios, las proteasas juegan un papel importante en la patogénesis de las enfermedades parasitarias. Hasta la fecha se han reconocido numerosas proteasas parasitarias; sin embargo, son el grupo de las serín-proteasas las menos estudiadas. En géneros patógenos pertenecientes a la familia de los Trypanosomatidae, las serín-proteasas han sido asociadas a la supervivencia de estos parásitos; no obstante, en tripanosomátidos monogenéticos no se han identificado esta clase de proteasas. En el presente trabajo, se identificó por primera vez la presencia de una actividad serín-proteasas en la fracción soluble (FS) de promastigotes de Leptomonas seymouri, la cual fue capaz de hidrolizar el sustrato sintético Bz-Arg-pNA (L-BAPNA) en un rango de pH comprendido entre pH 6-10 con un óptimo de actividad a pH 8. Esta actividad proteolítica fue inhibida por el TLCK, la Leupeptina y el AEBSF (inhibidores selectivos de serín-proteasas). Curiosamente, otros inhibidores de esta clase de proteasas como la Aprotinina y el PMSF no tuvieron efecto. Por otro lado, los inhibidores de cisteín, aspartíl y metalo-proteasas tampoco tuvieron efecto sobre la hidrólisis del sustrato L-BAPNA, indicando que la actividad identificada bajo nuestras condiciones experimentales, se trata de una serín-proteasa. Con el fin de ahondar en el entendimiento del papel que cumplen este tipo de enzimas en estos parásitos, se realizaron estudios del efecto del inhibidor de serín-proteasas TLCK (1μM, 100μM) sobre la proliferación y morfología de los promastigotes de L. seymouri. Las concentraciones utilizadas de este compuesto no tuvieron efecto; sin embargo, son necesarios más estudios con otros inhibidores de serín-proteasas, para establecer o no una relación directa entre la actividad identificada en la fracción soluble y la proliferación celular.