Identificación de las proteínas Gi/o heterotriméricas sensibles a mastoparán que inhiben a las guanililciclasas particuladas b y soluble en el músculo liso traqueal de bovinos

Abstract

Identificar las proteínas Gi/o heterotriméricas sensibles a Mastoparán y asociadas al m2AchR, que inhiben a las Guanililciclasas Particulada B (NPR-GC-B) y Soluble (sGC) en el músculo liso traqueal de bovinos (MLTB). Métodos: Se utilizaron fragmentos intactos de MLTB, para determinar actividad contráctil y los niveles de GMPc en presencia de agonistas e inhibidores. Adicionalmente, se utilizaron fracciones subcelulares de membrana de MLTB P1+P2 para medir la actividad de NPR-GC-B y P1+P220’’CC para medir la actividad de la sGC en presencia de péptidos C-Terminal de la subunidad a. Por último, se emplearon fracciones P1+P2 y P1+P220’’CC libre actividad del receptor muscarínico m3 (m3AchR) activadas con Mastoparán y Carbamilcolina, en presencia de anticuerpos anti-Ga-i/o y B para identificar las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR. Resultados: se encontró que el Mastoparán en MLTB intacto inhibe parcialmente la sGC, totalmente la NPR-GC y actúa como un inhibidor no competitivo de la contracción, tales efectos son a través de proteína Gi/o, ya que los mismos son revertidos con Toxina Pertussis (PTX), adicionalmente se encontró, que Mastoparán activa a las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR, sin activar a dicho receptor. Los resultados mostraron que las proteínas Gi/o asociadas al m2AchR que inhiben a la NPR-GC-B pertenecen a la subfamilia ao1B4, y las que inhiben a las sGC son a¡3B1 Conclusión: Las proteínas Gi/o pueden ser activadas directamente por Mastoparán, lo que puede constituir un mecanismo novedoso capaz de restituir la función moduladora que ejerce m2AchR sobre la permeabilidad de las vías aéreas