Producción del inhibidor endógeno recombinante de la Cisteín Peptidasa de Trypanosoma evansi

Abstract

Resumen La surra, o tripanosomosis equina, es una enfermedad causada por Trypanosoma evansi de suma importancia veterinaria en Venezuela. La búsqueda de nuevos blancos moleculares para el desarrollo de quimioterapias es prioritario. Las cisteín peptidasas y sus respectivos inhibidores, o ICP, con tamaños moleculares característicos entre los 12 y 15 kDa, han demostrado ser un blanco molecular prometedor. Se ha demostrado en Trypanosoma cruzi, que los ICP cumplen un rol importante en el desarrollo del parásito en el hospedador al regular la actividad de las cisteín peptidasas. Por la alta homología en las secuencias nucleotídicas y aminoacídicas que hay entre los ICP de T. evansi y T. cruzi, se cree que el ICP de T. evansi puede cumplir el mismo rol. Utilizando el sistema heterólogo de Escherichia coli, se logró clonar y expresar una proteína con un tamaño próximo a los 45 kDa. Esta proteína fue reconocida a través de Western blots con anticuerpos anti-ICP contra T. cruzi, indicando que posee epítopes característicos de un ICP del género Trypanosoma. Ensayos de inhibición por zimogramas, de la proteína recombinante contra las cisteín peptidasas de T. evansi, revelaron que la primera posee actividad inhibitoria sobre las cisteín peptidasas de 33 y 35 kDa de T. evansi, desde concentraciones de 55 nM hasta los 5 μM. No se observó inhibición aparente sobre la principal cisteín peptidasa de T. evansi, evansaína, de un tamaño de 28 kDa. Por lo tanto, se cree que la proteína recombinante oligomerizó durante su expresión, formando agregados solubles denominado cuerpos de inclusión, debido a un desbalance de las proteínas chaperonas de E. coli durante la inducción por IPTG. Palabras claves: surra, clonación, proteína heteróloga, oligomerización, inhibición.