Cuantificación β-Sitosterol y Lupeol por densitometría óptica en fracciones de Ruellia tuberosa . y su evaluación de la inhibición sobre el sistema enzimático glucosa-6-fosfatasa

Abstract

Resumen El presente trabajo de investigación, tuvo como objetivo cuantificar β-sitosterol y lupeolen las fracciones solubles en metanol-agua e insolubles en acetona de Ruellia tuberosa L. por densitometría óptica sobre placas de HPTLCy evaluar la inhibición de estas sobre el sistema enzimático glucosa-6-fosfatasa (G6Pasa). Para ello, se sometieron a extracción y separación los extractos metanólicos de las partes aéreas (tallos/hojas) y raíces de la planta por separado.La metodología para la cuantificación de estos compuestos se basó en preparar soluciones de concentraciones conocidas de los extractos de la especie estudiada y patrones, en placas de Cromatografía de Capa Fina de Alta Eficiencia (HPTLC),utilizando anisaldehído-ácido sulfúrico como agente de coloración. Luego, se desarrolló cada placa utilizando como fase móvil, la mezcla de solventes más idónea que permitiese la identificación comparativa del metabolito a ser cuantificado. La cuantificación se realizó a través de la digitalización de la imagen en el visiblede la placa desarrollada por medio de un escáner. Estas imágenes se analizaron con un programa denominado en este trabajo como UCV-Matlabrealizado por el Laboratorio de Espectroscopia Laser de la Escuela de Química de la Universidad Central de Venezuela, a través del programa MATLAB 7.5.0., el cual genera densitogramas que permiten relacionar la densidad óptica de cada mancha en la placa con la concentración relativa de un determinado compuesto en el extracto y cuantificar por comparación con una curvade calibración del patrón puro del compuesto que se desea cuantificar.Los resultados mostraron que las raíces deRuellia tuberosa L., posee (167,4±6,8) ppm del esterol, β-sitosterol y (129,36±0,69) ppm del triterpeno, lupeol. Además, el método de cuantificación desarrollado es preciso (%CV<5%), lineal (R2>0,99) y con límites de detección de 6,3–31,1ppm y 13,1–16,3ppm; y de cuantificación de 21,1–103,5ppmy 43,7–54,3ppm. Por otra parte, el método resulto ser simple, económico y rápido, en comparación con otras técnicas cromatográficas. Adicionalmente, se realizaron estudios de inhibición sobre el sistema glucosa-6-fosfatasa en microsomas intactos, sin histonas (–H), y en microsomas permeabilizados con histonas (+H).Las fracciones que se obtuvieron a partir de los extractos metanólicos de las raíces y partes aéreas de Ruellia tuberosa L.,presentaron mayor porcentaje de inhibición sobre el sistema enzimático G6Pasa en microsomas intactos, es decir, son inhibidores del transportador T1. Las fracciones pertenecientes a las raíces presentaron mayor porcentaje de inhibición sobre la G6Pasa en comparación con las provenientes de las partes aéreas. Por otro lado, las fracciones de mayor polaridad mostraronun porcentaje de inhibición considerable (>50% a 400 mg/L), atribuido a los derivados de ácidos fenilpropenoides,detectados por HPLC-UV/Vis. Dicho comportamiento también fue observado en las fracciones polares tanto de raíces como de partes aéreas. Palabras clave: Ruellia tuberosa L., CCFAF, HPTLC, Ruellia, sitosterol, Lupeol, Betulina,Densitometría Óptica, Cuantificación, G-6-Pasa, Glucosa-6-Fosfatasa, Inhibición.