Construcción y optimización de un equipo para lectura de celdas de ELISA por fluorescencia molecular

Abstract

Resumen En el presente trabajó se realizó la construcción y evaluación preliminar de un equipo de medición simultánea de fluorescencia molecular, teniendo como objetivo su aplicación futura en el análisis de muestras clínicas. Se ensayaron dos montajes experimentales: uno basado en un digitalizador de imágenes ( scanner) convencional y otro empleando un montaje convencional de fluorescencia por reflexión. En el primer caso no se logró obtener una sensibilidad adecuada. El montaje del equipo propuesto emplea lámparas fluorescentes convencionales como fuente de excitación, placas de 96 pozos para inmuno-ensayo de ELISA como porta muestras y una cámara fotográfica convencional como sistema de detección y registro de la señal de fluorescencia. para el procesamiento de la señal se empleó un programa de diseñado empleando Matlab. La evaluación analítica se realizó empleando soluciones de fluoresceína en una mezcla de etanol/agua. el intervalo lineal obtenido es relativamente limitado, típico de los métodos basados en medidas de fluorescencia. La sensibilidad, evaluada como la pendiente de la curva de calibración es sustancialmente menor que la obtenida en equipos comerciales, sin embargo, es lo suficientemente elevada para realizar análisis cuantitativos de especies de interés que no se encuentren en niveles de concentración de trazas. El equipo diseñado mostró sensibilidad, estabilidad y respuesta lineal para realizar análisis cuantitativo de hasta 96 muestras de forma simultánea en un corto tiempo.