Saber UCV
Repositorio Institucional
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https://saber.ucv.ve/handle/10872/15808
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| Title: | Identificación molecular de organismos Rickettsiales en caninos de diferentes regiones de Venezuela |
| Authors: | Chacón Gómez, Yaremis Carolina |
| Keywords: | Ehrlichiosis Monocitotrópica Canina y Anaplasmosis Trombocitotrópica Cíclica Garrapata Marrón Especie Canina |
| Issue Date: | 16-May-2017 |
| Series/Report no.: | Biblioteca Alonso Gamero Facultad de Ciencias;TG-19024 |
| Abstract: | RESUMEN La Ehrlichiosis Monocitotrópica Canina y la Anaplasmosis Trombocitotrópica Cíclica son enfermedades febriles transmitidas por la garrapata marrón del perro Riphicephalus sanguineus, cuyos agentes etiológicos son organismos Rickettsiales de la familia Anaplasmataceae de los géneros Ehrlichia y Anaplasma: Ehrlichia canis y Anaplasma platys respectivamente. Estas Rickettsias están ampliamente distribuidas en regiones tropicales y subtropicales y representan un problema de salud emergente al generar enfermedades de gran importancia veterinaria, debido a que las especies de los géneros Ehrlichia y Anaplasma son potencialmente zoonóticas. En Venezuela se han hecho estudios sobre la prevalencia de estas Rickettsias y de su posible repercusión en la salud humana, tanto en caninos como en humanos, lo que hace de su estudio enfocado en el diagnóstico molecular un importante aporte en la solución a este problema de salud pública. El diagnóstico de estos microorganismos se basa principalmente en la observación clínica del animal, así como también mediante técnicas hematológicas como el frotis de capa blanca con coloración tipo Romanovski; pruebas serológicas, flujo lateral (Snap IDEXX) y por último mediante técnicas moleculares, como es el caso del ensayo PCR. En Venezuela el frotis sanguíneo con coloración Giemsa es la metodología más empleada en el diagnóstico y en menor grado las pruebas moleculares, a pesar de su alta especificidad y sensibilidad, por lo que el principal objetivo de este trabajo estuvo dirigido en identificar molecularmente organismos Rickettsiales en canes de diferentes regiones de Venezuela, mediante PCR y secuenciación dirigidos al gen del ARNr 16S. Inicialmente, se evaluaron los cebadores de diversos ensayos PCR, a fin de seleccionar los de mejor desempeño. Seguidamente, se empleó el programa en línea “Multaling” y se alinearon las secuencias del ARNr16S tanto de E. canis como de A. platys y posteriormente utilizando el “Oligoexplorer” se diseñaron los cebadores específicos RYaF16S y RYaR16S. Posteriormente, los amplicones de 4 muestras de E. canis y de 5 de A. platys fueron secuenciados, analizados y comparados con las secuencias reportadas del gen ARNr 16S de estas Rickettsias en el GenBank. Detectamos luego de estos análisis una similaridad del 100% entre la cepa de A. platys obtenida y la reportada en Maracay, mientras que la cepa de E. canis presentó un alto grado de similaridad (99,8%) con el aislado E. canis Brazil-CO2 y los aislados Venezolanos E. canis VHE y VDE, difiriendo sin embargo en un nucleótido de la posición 808 con estos dos últimos, lo que sugiere que el aislado obtenido es diferente a los reportados en el país. Adicionalmente, basados en el análisis in sílico del polimorfismo en los sitios de restricción del gen ARNr 16S se escogió a la enzima XhoI para el diseño de un ensayo PCR-RFLP empleando el producto amplificado d 1450 pb por los iniciadores RYaF16S y RYaR16S. Como resultado se obtuvo que la secuencia de A. platys contiene dos sitios de corte para XhoI en la región amplificada y genera 3 fragmentos de 700, 600 y 150 pb. Por su parte el amplicón de E. canis contiene un solo sitio de corte generando un patrón específico de 2 bandas de 1300 y 150 pb. Las 5 muestras de A. platys y las 4 muestras de E. canis fueron evaluadas con este ensayo PCR-RFLP, permitiendo la identificación de A. platys en 4 de las muestras y de E. canis en las 4 muestras, demostrando que tanto la estrategia PCR-Secuenciación como la del PCR-RFLP desarrolladas en este trabajo permitieron la identificación especie-específica de estos organismos Rickettsiales y que representan una herramienta muy útil para el diagnóstico diferencial de los organismos Rickettsiales encontrados en Venezuela. |
| Description: | TUTOR: Dr. Armando Reyna ; Dra. Palmira Guevara |
| URI: | http://hdl.handle.net/10872/15808 |
| Appears in Collections: | Pregrado |
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