Diseño de una prueba que permita detectar la presencia de δ-endotoxinas de Bacillus thuringiensis variedad Kurstaki en un medio de cultivo

Abstract

RESUMEN Bacillus thuringiensis (Btk) es el principal agente de control biológico usado a nivel mundial. Su producción como bioinsecticida, requiere de formulaciones de medios de cultivo que permitan el crecimiento de la bacteria y la obtención del producto insecticida, es decir, de la -endotoxina contenida en el complejo esporacristal. En Venezuela, el desarrollo de metodologías que permitan evaluar el proceso fermentativo y a su vez detectar la capacidad efectiva de Btk para producir cristales tóxicos ha sido limitado. Por este motivo, en este trabajo se planteó como objetivo diseñar una prueba que permita detectar la presencia de -endotoxinas, durante el desarrollo de un cultivo de Btk a través de inmunoensayos. Para ello, se procedió a purificar la proteína Cry1Aa, la cual fue empleada para la producción de un suero hiperinmune utilizando conejos como modelo experimental. La respuesta de anticuerpos en función del tiempo fue monitoreada a través de un ELISAi, y el reconocimiento de la proteína por parte del suero hiperinmune fue verificado empleando las técnicas de Western blot y Dot Blot. Finalmente, se evaluó la cinética de síntesis de la proteína Cry1Aa de Btk en medio A80, mediante las técnicas inmunoquímicas mencionadas, evidenciando el incremento progresivo en el reconocimiento de esta proteína hasta la fase estacionaria, lograndose de esta manera la estandarización de un método sencillo y reproducible para la detección de - endotoxinas.