Efecto de la Carbamilcolina y el veneno de escorpión Tityus zulianus en la secreción de proteínas de los acinos pancreáticos aislados de ratón NIH

Resumen

El envenenamiento accidental con el escorpión Tityus zulianus (Tz) produce manifestaciones clínicas principalmente cardiopulmonares. Sin embargo, en modelos experimentales con ratones BALB/c se ha demostrado que el veneno de Tz (TzV) produce daño pancreático y aumento de las concentraciones séricas de catecolaminas. El objetivo de este estudio es determinar los mecanismos fisiopatológicos asociados a la hiperestimulación autonómica que conduce al desarrollo de la pancreatitis en un modelo experimental de acinos pancreáticos aislados. Los acinos pancreáticos se obtuvieron a partir de pancreata de ratón sometida a la digestión con colagenasa, con lo cual se separan los acinos que posteriormente se mantienen en baño térmico. Una vez estabilizados los acinos, se aplicaron tratamientos con carbamilcolina (Cch) y/o TzV a diferentes concentraciones para evaluar la secreción de proteínas en una curva concentración respuesta. Los niveles de proteínas y tripsina se determinaron por espectrofotometría. Los resultados muestran que tanto la Cch (5-30μM) como el TzV (2,5-128,5μg/ml) incrementan significativamente de forma dependiente de la concentración la liberación de proteínas al medio extracelular. Adicionalmente, se observó que al administrar en forma conjunta, Cch 10 μM y TzV 128,5 μg/ml se produce un efecto sinérgico (180±2%), el cual consiste en un incremento superior a lo observado cuando se aplican de manera individual. En conclusión, el TzV incrementa significativamente la secreción de proteínas ya sea de forma individual o en combinación con la Cch, con lo cual se mimetizan los efectos del neurotransmisor endógeno acetilcolina (Ach).

Abstract

Accidental poisoning with the scorpion Tityus zulianus (Tz) produces mainly cardiopulmonary clinical manifestations. However, in experimental models with BALB/c mice it has been shown that the venom of Tz (TzV) causes pancreatic damage and increased serum catecholamines values. The objective of this study is to determine the pathophysiological mechanisms associated with autonomic hyperstimulation leading to the development of pancreatitis in an experimental model of isolated pancreatic acini. The pancreatic acini were obtained from mouse pancreata subjected with collagenase digestion, whereby the acini are separated and subsequently kept in a thermic bath. The stabilized acini were treated treatments with different concentration carbamylcholine (Cch) and / or TzV to evaluate the secretion of proteins in a concentration response curve. Protein levels were determined by spectrophotometry. The results show that both the Cch (5-30μM) and the TzV (2.5-128.5μg / ml) significantly increase the release of proteins to the extracellular medium of concentration-dependent of Cch and TzV. Synergistic effect were observed with the combinations Cch 10 μM and TzV 128.5 μg/ml in this order with any increment of 180 ± 2%proteins secretion. In conclusion, TzV significantly increases protein secretion either or in combination with Cch, which mimics the effects of the endogenous neurotransmitter acetylcholine (Ach).