ANTICUERPOS ANTI-RECEPTORES β1 ADRENÉRGICOS EN PACIENTES CON ENFERMEDAD DE CHAGAS: ESTANDARIZACION DE LA PRUEBA (ELISA) CON EL PEPTIDO SINTETICO DE LA SEGUNDA ASA EXTRACELULAR DEL RECEPTOR β1 ADRENÉRGICO
Palabras clave:
Enfermedad de Chagas, ELISA, receptores β1 adrenérgico, Estandarización, péptidos sintéticos, Chagas disease, β1 adrenergicreceptor, Standarization, synthetic peptideResumen
La Enfermedad de Chagas (ECh), es causada por el agente etiológico Trypanosomacruzi (T. cruzi) y es el principal causante de cardiomiopatías crónicas en América Latina.Probablemente el daño cardiaco es la consecuencia no solamente de la persistencia delparásito en el tejido cardiaco sino también de una regulación defectuosa de la respuestainmunitaria (teoría autoinmune)derivada de la auto-reactividad contra antígenos propios.Se ha demostrado la presencia de anticuerpos dirigidos contra la segunda asa extracelulardel receptor β1 adrenérgico en suero de pacientes conECh. La estandarización de la pruebaes necesaria para garantizar la obtención de resultados confiables y comparativos en ladeterminación de la presencia de anticuerpos anti-β1 adrenérgicos en pacientes en fasestempranas de la infección y vigilar de cerca su evolución clínica. Se ensayaron diferentesconcentraciones del antígeno (30μg/ml, 50μg/ml y 70 μg/ml), diluciones de los sueros (1/20,1/50, 1/60) y del conjugado (anti-IgG humano, acoplado a fosfatasa alcalina) en placas de96 pozos con sueros de personas con ECh con alta, media y baja reactividad en el ELISAde diagnóstico así como de personas negativas a fin de fijar el punto de corte de la prueba.Las condiciones evaluadas para la estandarización de la prueba resultaron apropiadas para ladetección de los anticuerpos anti-β1 adrenérgicos en pacientes con Enfermedad de Chagas.
ANTIBODIES ANTI - RECEPTOR β1 ADRENERGIC CHAGASDISEASE PATIENTS: STANDARIZATION TEST (ELISA) WITHSYNTHETIC PEPTIDE OF THE SECOND EXTRACELLULARRECEIVER ASA β1 ADRENERGIC
Abstract: Chagas disease is caused by the etiologic agent tripanosomacruzi (T. cruzi)and is the maincause of chronic cardiomyopathy in Latin America. Probably the heart damage is a resultnotonly the persistence of the parasite in the cardiac tissuebut also of a defective regulation ofthe immune response (autoimmune theory). It has demonstrated the presence of antibodiesdirected against the second extracellular loop β1 adrenergic receptor in serum of patientswith Ech. The standarization of testing is necessary to ensure obtaining reliable resultsand comparative, the objective study was performed to standarize the test (ELISA) for thedetection of anti-β1 adrenergic antibodies in patients with Ech,were determined optimalconcentrations of antigen (30μg/ml, 50μg/ml y 70 μg/ml),optimal dilution of sera(1/20, 1/50,1/60) and the optimal conjugate title (anti - human IgG, coupled to alkaline phosphatase) in96-well plates with serums of high, medium and low reactivity. To discriminate positivesera from negative the cutoff was determined. It was selected as the optimal concentration ofantigen50μg/mldilutions of serum 1/50 and conjugate1/500the cut that was set at D.O 0,278nm. The conditions evaluated for standardized testing, were appropriate for the detection ofanti-β1 adrenergic antibodies in patients with Chagas disease.
