APOPTOSIS MEDIADA POR CERAMIDAS EN LA CARCINOGENESIS INDUCIDA DE GLANDULA PAROTIDA

Resumen

La apoptosis es un proceso relacionado con el cáncer ya que las células malignas evaden los mecanismos apoptóticos. La parótida es el sitio más común de tumores de glándulas salivales y solo el 15 % es detectado en estadios tempranos. Conocer que ocurre con las moléculas involucradas en la apoptosis y utilizarlas como biomarcadores, resultaría de importancia para aplicar nuevas terapias y prevención. En este trabajo estudiamos alteraciones tempranas de la vía apoptótica inducida por Fas, mediada por ceramidas en tumorogénesis experimental. Se utilizaron ratas inyectadas con 9, 10- dimethyl 1, 2 benzanthracene (DMBA), en cada glándula parótida. Las muestras fueron analizadas a 7; 30 y 150 días post tratamiento. Se realizó coloración de (H/E), inmunocitoquímica para Fas, determinación de ceramidas por cromatografía e capa delgada de alto rendimiento, "patrón en escalera" de ADN en gel de agarosa y secuenciación del los exones 3 y 4 del gen fas. A 7 días se presentaron cambios histológicos leves y una mutación en el exón 4. No se detectó la presencia de ceramidas. A 30 y 150 días hubo cambios de tipo tumorogénicos y necrosis, mutaciones en el exón 4 de Fas y presencia de ceramidas. A ningún tiempo el patrón en escalera de ADN demostró apoptosis. A los 7 días no se producen cambios suficientes par inducir la apoptosis, mientras que a 30 y 150 días se estaría formando el complejo Fas-Fas L con aumento de las ceramidas , pero las mutaciones del exón 4 podrían estar modificando la proteína Fas a nivel de su dominio de muerte impidiendo así la transducción de la señal de apoptosis.

ABSTRACT
Apoptosis is a process linked to cancer because malignant cells evade apoptotic mechanisms. The parotid gland is the most common site of salivary gland tumors and only 15% is detected in early stages. Know what happens to the molecules involved in apoptosis and use as biomarkers, it would be important to apply new therapies and prevention. In this paper we study early alterations of the Fas-induced apoptotic pathway mediated by ceramide in experimental tumorigenesis male rats were used, injected with 9, 10 - dimethyl 1, 2 benzanthracene (DMBA) in each parotid gland. The samples were analyzed at 7, 30 and 150 days after treatment. Staining H / E, was performed immunocytochemistry for Fas, determination of ceramides by High performance thin layer chromatography ( HPTLC), ladder of DNA in agarose gel and sequencing of exons 3 and 4 of the fas gene. A 7 days it showed mild histological changes and a mutation in exon 4. Not ceramides were detected . At 30 and 150 days we found tumourigenic changes and necrosis type, mutations in exon 4 of Fas and the presence of ceramides. At no time DNA ladder showed apoptosis. After 7 days no change enough torque to induce apoptosis, while at 30 and 150 days would be forming the complex Fas-Fas L with increase of ceramides, but mutations of exon 4 could be changing the Fas protein level of his death domain thereby preventing the signal transduction of apoptosis.