Acta Científica de la Sociedad Venezolana de Bioanalistas Especialistas

EDITORIAL

María Fátima Garcés — 2024-07-03

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Acta de la Sociedad Venezolana de Bioanalistas Especialistas — 2024-07-03

INFORMACIÓN PARA AUTORES

Acta de la Sociedad Venezolana de Bioanalistas Especialistas — 2024-07-03

CUANTIFICACIÓN DE LOS NIVELES DE CARGA VIRAL DE SARS-COV-2 POR PCR EN TIEMPO REAL EN INDIVIDUOS REFERIDOS AL INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE “RAFAEL RANGEL”

Valerie Ross — 2024-07-03

Introducción: COVID-19, infección viral altamente transmisible y patógena causada por el SARS-CoV-2, surgió en China y se extendió por el mundo creando una pandemia. Se ha demostrado que la dinámica viral tiene influencia en el progreso de la enfermedad. Es importante contar con herramientas que permitan evaluar su curso. Por ello, se propone estandarizar la técnica de qRT-PCR para la cuantificación de los niveles de carga viral del SARS-CoV-2. Objetivo: Estandarizar la técnica de qRT-PCR para la cuantificación de los niveles de carga viral del SARS-CoV-2 en pacientes referidos al Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” (INHRR). Metodología: Se realizó una curva de calibración a partir de un estándar del gen E del SARS-CoV-2 con 108 copias virales/μL, se realizaron diluciones seriadas 1:10 y se establecieron 8 puntos para obtener la función lineal necesaria mediante los métodos estadísticos adecuados. Se cuantificó la carga viral de 230 muestras provenientes del tracto respiratorio superior mediante qRT-PCR, extraídas previamente con el método de perlas magnéticas y/o columnas de sílica gel. Resultados: Se obtuvo una curva estándar de calibración con un coeficiente de correlación (r2 ) de 0,9959 y Eficiencia (E) de 79%. Se correlacionó el Ct obtenido de las muestras con el número de copias virales presentes en ellas, obteniéndose un promedio de carga viral que oscila en el orden de 104 copias virales/μL en sintomáticos y 103 copias virales/μL en asintomáticos. Conclusión: Este trabajo representa el primer reporte de estandarización de una metodología para la cuantificación de los niveles de carga viral del SARS-CoV-2 en muestras del tracto respiratorio superior en Venezuela, para la implementación y uso de una herramienta útil en el monitoreo de los casos de COVID-19. Se observó que los niveles de carga viral en las muestras de estudio presentaban un promedio de carga viral que oscila en el orden de 103 - 104 copias virales/μL

ESTUDIO PILOTO DEL EFECTO DEL TIPO Y CONSERVACION DE LA MUESTRA Y MÉTODO, EN LA MEDICION DE LA CONCENTRACION DE LAS FRACCIONES C3 Y C4 DEL COMPLEMENTO.

Soriuska Mayora Hernandez — 2024-07-03

La determinación del complemento juega un papel importante en el diagnóstico y seguimiento de enfermedades inflamatorias y de origen autoinmune, es por ello que a lo largo del tiempo los laboratorios han intensificado esfuerzos en desarrollar e implementar técnicas que permitan evaluar de manera eficiente estos biomarcadores. Recientemente se ha propuesto que, para el análisis de componentes individuales del complemento, debe usarse el plasma anticoagulado con ácido etilendiaminotetracético (EDTA), especialmente cuando se miden productos de activación, y que además la conservación de las muestras debe hacerse a -80ºC. Sin embargo, en Venezuela la mayoría de los laboratorios siguen utilizando muestras de suero y solo tienen disponibilidad de congeladores de -20°C. Es por ello que nos planteamos los siguientes objetivos: Comparar las concentraciones obtenidas para la determinación de C3 y C4 utilizando muestras de suero y plasma, evaluar el desempeño de las técnicas de nefelometría e inmunodifusión radial (IDR) para la determinación de las fracciones C3 y C4 del complemento y, por último, determinar el grado de afectación de la muestra, posterior al primer ciclo de congelación a -20°C y descongelación de las mismas. Para ello se evaluaron muestras de suero y plasma obtenidas de 12 individuos. Se evidenció que las muestras de plasma-EDTA mostraron mejor correlación entre ambas técnicas evaluadas, se confirmó la superioridad de la técnica de nefelometría sobre la IDR y se demostró que la prueba de C3 es menos sensible a la descongelación de las muestras que la determinación del C4.

POLIMORFISMO -31118 G/A (rs1761667) DEL GEN DEL RECEPTOR CD36 Y LAS VARIANTES 388 T/C (rs429358) Y 526 C/T (rs7412) DEL GEN DE LA APO-E EN INDIVIDUOS OBESOS

Angélica Fernándes — 2024-07-03

Introducción: La obesidad es una patología compleja en donde el ambiente y la genética del individuo participan en la regulación del peso y la grasa corporal. Estudios relacionados con el gen CD36, polimorfismo rs1761667 y el gen APOE, variantes 388 T/C (rs429358) y 526 C/T (rs7412) han sido asociados con variaciones en la concentración de las lipoproteínas séricas, sin embargo, estos han sido muy contradictorios. Objetivo: Evaluar la asociación del polimorfismo -31118 G/A (rs1761667) del gen CD36 y las variantes 388 T/C (rs429358) y 526 C/T (rs7412) del gen APOE con el riesgo a desarrollar obesidad. Metodología: La muestra en estudio comprende un grupo de individuos obesos (n=110) y un grupo control de individuos normopeso (n=114). La extracción del ADN genómico se realizó por el método de Bunce modificado, para la identificación de los polimorfismos se realizó la metodología de PCR[1]RFLP. Resultados y conclusiones: Los individuos con obesidad presentaron concentraciones significativamente incrementadas de colesterol total, LDL-c, VLDL-c, triglicéridos basales y postprandiales a las 2 y 4 horas, insulina basal, y HOMA con respecto a las concentraciones del grupo control. No se observó asociación entre los polimorfismos -31118 G/A (rs1761667) del gen CD36, 388 T/C (rs429358) y 526 C/T (rs7412) del gen APOE y el riesgo a desarrollar obesidad, intolerancia a las grasas ni resistencia a la insulina.

DETECCIÓN DIRECTA DE SARS-COV-2 MEDIANTE RT-qPCR EN PACIENTES REFERIDOS AL INSTITUTO NACIONAL DE HIGIENE “RAFAEL RANGEL”

Giulianna Antonelli — 2024-07-03

El método gold-estándar para la detección del SARS-CoV-2 es la RT-qPCR, sin embargo, ésta requiere de un paso de extracción y purificación previo que retrasa la entrega de resultados, especialmente en los momentos de mayor demanda diagnóstica. Con el fin de reducir el tiempo de procesamiento fueron evaluados tres métodos de extracción directa sin purificación de la muestra: buffer de lisis, calentamiento a 70°C por 10 min y 95°C por 5 minutos. Para ello, fueron seleccionadas 134 muestras conservadas de individuos con sospecha de Covid-19, referidos al INHRR durante el periodo Junio 2021-Febrero 2022, las cuales fueron procesadas por cada uno de los métodos planteados y seguidamente llevadas a RT-qPCR; los resultados obtenidos fueron comparados con el método gold estándar. En este estudio fue posible la detección directa del SARS-CoV-2 con una sensibilidad superior al 80% en los tres métodos evaluados, conservando un buen grado de concordancia con el método de referencia (k=0,79 para buffer de lisis, k=0,85 y k=0,84 para calentamiento a 70°C y 95°C respectivamente), y sin mostrar diferencias significativas (p=0,92, α=0,05) entre las variaciones de Ct obtenidos por las diferentes metodologías. La detección directa a partir de calentamiento a 70°C por 10 min es la metodología que mostró mayor sensibilidad (86,30%), estos resultados representan un hallazgo valioso para la comunidad científica del país ya que ofrece una alternativa diagnóstica que permite reducir el tiempo de entrega de resultados, contribuyendo con la contención de contagios en los puntos de mayor demanda.

CRÉDITOS

Acta de la Sociedad Venezolana de Bioanalistas Especialistas — 2024-07-03

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