SABER UCV >
2) Tesis >
Doctoral >

Por favor, use este identificador para citar o enlazar este ítem: http://hdl.handle.net/123456789/7776

Título : Caracterización morfológica y molecular de aislamientos de fusarium verticillioides (sacc.) nirenber en maíz (zea mays l.) de algunas localidades de los Estados Aragua y Guárico de Venezuela
Autor : Manrique Rodríguez, Félix Lorgio
Palabras clave : Fusarium verticillioides
PCR
identificación molecular
incidencia
maíz
Fusarium verticillioides
corn
incidence
molecular identification
Fecha de publicación : 1-Dec-2014
Citación : 2014;1387-002
Resumen : La presencia de F. verticillioides y de altos contenidos de fumonisinas en los granos de maíz ha sido verificada consistentemente en los últimos años en Venezuela por lo que es muy importante determinar la incidencia de este hongo en el cultivo y en los granos almacenados que se destinan para el consumo humano y animal. Este patógeno, caracterizado por su variabilidad en cuanto a las características morfológicas, moleculares y toxigénicas, afecta el cultivo de maíz en muchas localidades de los estados Aragua y Guárico. Esta investigación tuvo como objetivo caracterizar morfológica y molecularmente aislados de F. verticillioides en maíz, provenientes de algunas localidades de los estados Aragua y Guárico, donde se muestrearon fincas en producción, colectando granos y plantas con y sin síntomas de la enfermedad causada por este patógeno. De estas muestras se realizaron aislamientos, con la finalidad de detectar la presencia de F. verticillioides. Para evaluar la incidencia del hongo en los granos, se tomaron 200 granos por cada tratamiento o localidad, con 4 repeticiones de 50 granos cada una, colocando 5 granos por cápsula Petri con Papa Dextrosa Agar (PDA). Se realizó un análisis de varianza y una prueba de medias de Tukey. Para la evaluación de la patogenicidad, el inóculo se obtuvo a partir de cada uno de los 101 aislados puros de F. verticillioides, utilizando para ello plántulas de maíz sanas de 7 días, del híbrido Dorado 5 de la empresa SEFLOARCA. Se asperjaron con la suspensión de conidios de cada uno de los aislados de F. verticillioides a la concentración de 1x106conidios/ml, luego se colocaron en cámara húmeda por 3 días. A los 14 días después de la inoculación se realizaron los reaislamientos respectivos, de plantas con y sin síntomas, con el propósito de verificar la patogenicidad de cada uno de los aislados. Para la identificación taxonómica del patógeno, se llevó a cabo la siembra en PDA de cada uno de los 101 aislados, realizando preparados microscópicos y microcultivos. Para confirmar la identidad de los diferentes aislados de F. verticillioides se consideraron las características macroscópicas y microscópicas, que permitieron realizar las descripciones. Para el análisis macroscópico se consideraron el color, relieve, forma y rapidez de crecimiento de la colonia. Para la caracterización microscópica se consideraron la forma y el tamaño de los macroconidios, microconidios, conidióforos, fiálides y la presencia o no de clamidosporas. Luego se realizaron comparaciones con las claves para especies de F. verticillioides. En cada una de los aislados se procedió al análisis molecular por medio de la técnica de PCR. Se obtuvo ADN de cada uno de los aislados, se les realizó y verificó su calidad en gel de agarosa al 1,2 %, resultando de muy buena calidad, donde se analizaron 77 aislados identificados y caracterizados morfológicamente. Para la identificación molecular se utilizaron los iniciadores VER1 y VER2. Los resultados encontrados confirman la identificación macroscópica y microscópica de los aislados de F. verticillioides en medio PDA al compararlas con las descripciones de las claves taxonómicas. De los 101 aislados caracterizados morfológicamente, todos fueron identificados como F. verticillioides y de los 77 aislados caracterizados morfológicamente, cuando se aplicó la prueba de PCR se confirmó su identificación. La presencia de Fusarium verticillioides en todas las localidades indica que es un patógeno muy importante en los campos comerciales de maíz en los estados Aragua y Guárico.
Descripción : The presence of F. verticillioides and high levels of fumonisin in corn kernels verified consistently in recent years in Venezuela and it is very important to determine the incidence of this fungus in culture and in stored grains intended for human consumption and animal. This pathogen, characterized by variability in morphological, molecular and toxigenic characteristics affect the corn crop in many localities of Aragua and Guárico. This study aimed to characterize morphologically and molecularly isolated from F. verticillioides on maize from some localities of Aragua and Guárico where production crops were sampled, collecting grains and plants with and without symptoms of the disease caused by this pathogen. Isolates from these samples were performed in order to detect the presence of F. verticillioides. To assess the impact of fungus in grains, 200 grains were taken for each treatment or locality, with 4 replicates of 50 grains each, placing 5 grains per Petri dish with Potato Dextrose Agar (PDA). Analysis of variance and Tukey test was performed. For evaluation of the pathogenicity, inoculum was obtained from each of the 101 pure isolated of F. verticillioides, using healthy seedling corn of 7 days, hybrid Dorado 5 from SEFLOARCA company. They were sprayed with the conidia suspension of each of the isolates of F. verticillioides with the concentration of 1x106conidia/ml, then placed in a moist chamber for 3 days. At 14 days after inoculation the respective reisolation, in plants with and without symptoms, with the purpose of verifying the pathogenicity of individual isolates were performed. For the taxonomic identification of the pathogen was carried out on PDA placing each of the 101 isolates, prepared by performing microscopic and microcultures. To confirm the identity of the different isolates of F. verticillioides was considered the macroscopic and microscopic features that allowed for descriptions. Considered the color, relief, shape and speed of growth of the colony to the macroscopic analysis. Considered the shape and size of macroconidia, microconidia conidiophores, phialides and the presence or absence of chlamydospores for microscopic characterization. Then comparisons were made with keys to species F. verticillioides. In each of the isolates we proceeded to molecular analysis by PCR. DNA from each of the isolates were obtained, were tested and verified quality agarose gel 1.2%, resulting in good quality, where 77 isolates analyzed morphologically identified and characterized. For the molecular identification VER1 and VER2 primers were used. The results confirm the macroscopic and microscopic identification of the isolates of F. verticillioides on PDA medium when compared with the descriptions of taxonomic keys. Of the 101 isolates characterized morphologically, all were identified as F. verticillioides and 77 isolates characterized morphologically, when the test was applied PCR identification was confirmed. The presence of Fusarium verticillioides in all localities indicates a very important in commercial corn fields in Aragua and Guárico pathogen.
URI : http://saber.ucv.ve/jspui/handle/123456789/7776
Aparece en las colecciones: Doctoral

Ficheros en este ítem:

Fichero Descripción Tamaño Formato
T026800009735-0-TESIS_DOCTORAL._LORGIO-000.pdf5.12 MBAdobe PDFVisualizar/Abrir

Los ítems de DSpace están protegidos por copyright, con todos los derechos reservados, a menos que se indique lo contrario.

 

Valid XHTML 1.0! DSpace Software Copyright © 2002-2008 MIT and Hewlett-Packard - Comentarios