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Título : EFECTO DE LA TROMBINA EN LA PRODUCCIÓN DE IFN-γ POR CÉLULAS NATURAL KILLER
Autor : Medina Moreno, Angelymar
Palabras clave : Células NK
Trombina, IFN-γ, IL-10
Sistema inmunitario
Fecha de publicación : 7-Mar-2017
Citación : Biblioteca Alonso Gamero Facultad de Ciencias;TG-20424
Resumen : RESUMEN Las células NK forman parte importante de los mecanismos efectores del sistema inmunitario innato, contribuyendo activamente a la defensa del cuerpo humano contra las células tumorales y las células infectadas con microorganismos intracelulares. La trombina, además ser una proteasa importante en la cascada de la coagulación y la hemostasia en general, desempeña múltiples roles en diversos procesos, como: inflamación, alergia, crecimiento tumoral, metástasis, remodelación tisular, y la cicatrización de heridas. La trombina es capaz de activar a los receptores PARs, específicamente PAR1, PAR3 y PAR4. En el año 2014 el grupo de investigación que dirige el presente proyecto, demostró que las células NK expresan PAR1, PAR2 y PAR3. Sin embargo, no se tiene información acerca de los efectos de la trombina sobre las células NK. Recientemente, este mismo grupo de investigación encontró mediante estudios de microarreglos una regulación negativa inducida por la trombina en la expresión del gen que codifica para IFN-γ en células NK no estimuladas. Partiendo de estos resultados se planteó como objetivo estudiar el efecto de la trombina en la expresión de IFN-γ y a su vez, en la expresión de IL-10 a nivel de transcripción por células NK estimuladas por IL-2/IL-12. Para evaluar el efecto de la trombina a nivel de transcripción se partió de un concentrado de glóbulos blancos humano, también llamado, buffy coat. Se aislaron células mononucleares y glóbulos rojos mediante centrifugación sobre Ficoll-PaqueTM Plus. Seguidamente, se realizó un paso de incubación de las células mononucleares para permitir la adherencia de los monocitos a la placa de cultivo y obtener en suspensión una población de células enriquecida en linfocitos. 2 Los glóbulos rojos y los linfocitos obtenidos se mezclaron en una proporción 50:1 para llevar a cabo la purificación de las células NK, mediante un coctel de inmunoselección negativa. La pureza de las células NK fue determinada mediante citometría de flujo. Las células NK fueron divididas en varios grupos; los controles negativos del estudio consistieron en células NK sin estímulo y células NK sin estímulo tratadas con trombina, por su parte, los grupos experimentales consistieron en células NK estimuladas con distintas concentraciones de IL-2 e IL-12 durante 4 horas, con y sin tratamiento previo con trombina a una concentración final de 10 U/mL. El tratamiento con trombina por 2 ó 18 horas, se realizó en medio RPMI, libre de suero fetal bovino (SFB) durante la primera hora de incubación, posteriormente, se añadió SFB a una concentración final de 1%. Cumplido el tiempo de estimulación, se aisló el ARN total de las células NK mediante el kit RNeasy Mini (Qiagen) siguiendo las instrucciones del fabricante. Seguidamente, se sintetizó su ADN complementario mediante el kit High Capacity RNA-to-cDNA (Applied Byosystems). El efecto de dichos tratamientos sobre la expresión del ARN mensajero del IFN gamma y de la IL-10 en las células NK fue determinado mediante PCR en Tiempo Real (qPCR) usando primers específicos y el kit Absolute qPCR SYBR Green Rox Mix (Thermo Scientific). Los resultados indican que la trombina induce una regulación negativa sobre la expresión de IFN-γ en células NK estimuladas por IL-2/IL-12, mientras que no ejerce efecto significativo sobre la expresión de la IL-10 en estas células. Palabras claves: células NK, trombina, IFN-γ, IL-10, sistema inmunitario, coagulación sanguínea.
Descripción : TUTOR: Dra. Mercedes López ; Prof. Valentina Salas
URI : http://hdl.handle.net/123456789/14908
Aparece en las colecciones: Pregrado

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