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Título : ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO DE CÉLULAS MESENQUIMALES DEL ESTROMA DE LA MEMBRANA AMNIÓTICA HUMANA. POTENCIALIDAD OSTEOCONDROGÉNICA
Autor : López, Ricardo
Palabras clave : Células mesenquimales del estroma
Membrana amniótica humana
Potencialidad osteocondrogénica
Fecha de publicación : 6-Feb-2017
Citación : Biblioteca Alonso Gamero Facultad de Ciencias;TG-19381
Resumen : En la actualidad, se encuentra en pleno desarrollo la investigación acerca de las diversas fuentes de obtención de las células madre. Si bien, es importante resaltar que estas células presentan una variedad de características destacables y prometedoras para el campo de la biología y la medicina regenerativa; aún existen diversos aspectos en cuestión con respecto a la naturaleza y los problemas éticos que se desencadenan a partir del estudio de estas células. La membrana amniótica humana (MAH), es una nueva fuente de células madre, de baja inmunogenicidad, de fácil acceso sin que suponga ningún riesgo para el donante, no presenta problemas éticos y además provee de suficiente material celular. Estudios recientes acerca del aislamiento de células mesenquimales y epiteliales de la MAH han demostrado que estas células madre presentan propiedades pluripotentes. En este contexto, se planteó como objetivo de este trabajo, la estandarización de los métodos para el aislamiento, caracterización y la evaluación del potencial de diferenciación osteocondrogénico de las células mesenquimales del estroma de la membrana amniótica humana. Para ello, se utilizaron placentas humanas donadas con consentimiento informado y la aprobación del Comité de Bioética de la Facultad de Ciencias, UCV. La MAH fue aislada del corion de forma manual, posteriormente se realizó la disgregación mecánica y enzimática con la colagenasa tipo I. Los cultivos de células mesenquimales se caracterizaron con un microscopio invertido de contraste de fases, coloraciones de rutina, determinaciones inmunocitoquímicas y mediante sondas fluorescentes. Posteriormente, se realizaron subcultivos para evaluar el potencial de diferenciación de las células utilizando dos estrategias de cultivo: cultivo en monocapa y sistema de cultivo tridimensional en micromasas. A estos cultivos se les realizaron distintos ensayos histoquímicos e inmunohistoquímicos con el fin de detectar la presencia de diversos componentes de la matriz extracelular que también se encuentran presentes en células del tejido cartilaginoso y el tejido óseo. Se logró estandarizar un método para el establecimiento y caracterización del cultivo primario, manteniéndose la morfología típica a través de los subcultivos sin rasgos aparentes de senescencia. En los cultivos se apreció una subpoblación de células con morfología tipo fusiforme que expresa marcadores de células mesenquimales progenitoras; Stro-1 y vimentina. También se observó otra subpoblación de células de amplio volumen citoplasmático con numerosos lisosomas en la región perinuclear del citoplasma. Por último, la presencia de GAG carboxilados y sulfatados, de proteoglicanos en la matriz extracelular de las micromasas, así como también la expresión de colágeno tipo II, principal marcador de condrogénesis indican que las células mesenquimales de la membrana amniótica humana se diferenciaron hacia el linaje condrogénico bajo todas las condiciones ensayadas, incluso el sistema tridimensional de micromasas permitió que las células en presencia de medio control y ausencia de inductores se diferenciaran espontáneamente hacia este linaje, sin embargo no se logró la diferenciación a nivel osteogénico, mientras que si hay indicios de mineralización de la matriz extracelular en algunas zonas del cultivo bidimensional.
Descripción : Tutor: Dra. Elizabeth Merentes D.
URI : http://hdl.handle.net/123456789/14281
Aparece en las colecciones: Pregrado

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