Caracterización morfológica y molecular de aislamientos de fusarium verticillioides (sacc.) nirenber en maíz (zea mays l.) de algunas localidades de los Estados Aragua y Guárico de Venezuela

Abstract

La presencia de F. verticillioides y de altos contenidos de fumonisinas en los granos de maíz ha sido verificada consistentemente en los últimos años en Venezuela por lo que es muy importante determinar la incidencia de este hongo en el cultivo y en los granos almacenados que se destinan para el consumo humano y animal. Este patógeno, caracterizado por su variabilidad en cuanto a las características morfológicas, moleculares y toxigénicas, afecta el cultivo de maíz en muchas localidades de los estados Aragua y Guárico. Esta investigación tuvo como objetivo caracterizar morfológica y molecularmente aislados de F. verticillioides en maíz, provenientes de algunas localidades de los estados Aragua y Guárico, donde se muestrearon fincas en producción, colectando granos y plantas con y sin síntomas de la enfermedad causada por este patógeno. De estas muestras se realizaron aislamientos, con la finalidad de detectar la presencia de F. verticillioides. Para evaluar la incidencia del hongo en los granos, se tomaron 200 granos por cada tratamiento o localidad, con 4 repeticiones de 50 granos cada una, colocando 5 granos por cápsula Petri con Papa Dextrosa Agar (PDA). Se realizó un análisis de varianza y una prueba de medias de Tukey. Para la evaluación de la patogenicidad, el inóculo se obtuvo a partir de cada uno de los 101 aislados puros de F. verticillioides, utilizando para ello plántulas de maíz sanas de 7 días, del híbrido Dorado 5 de la empresa SEFLOARCA. Se asperjaron con la suspensión de conidios de cada uno de los aislados de F. verticillioides a la concentración de 1x106conidios/ml, luego se colocaron en cámara húmeda por 3 días. A los 14 días después de la inoculación se realizaron los reaislamientos respectivos, de plantas con y sin síntomas, con el propósito de verificar la patogenicidad de cada uno de los aislados. Para la identificación taxonómica del patógeno, se llevó a cabo la siembra en PDA de cada uno de los 101 aislados, realizando preparados microscópicos y microcultivos. Para confirmar la identidad de los diferentes aislados de F. verticillioides se consideraron las características macroscópicas y microscópicas, que permitieron realizar las descripciones. Para el análisis macroscópico se consideraron el color, relieve, forma y rapidez de crecimiento de la colonia. Para la caracterización microscópica se consideraron la forma y el tamaño de los macroconidios, microconidios, conidióforos, fiálides y la presencia o no de clamidosporas. Luego se realizaron comparaciones con las claves para especies de F. verticillioides. En cada una de los aislados se procedió al análisis molecular por medio de la técnica de PCR. Se obtuvo ADN de cada uno de los aislados, se les realizó y verificó su calidad en gel de agarosa al 1,2 %, resultando de muy buena calidad, donde se analizaron 77 aislados identificados y caracterizados morfológicamente. Para la identificación molecular se utilizaron los iniciadores VER1 y VER2. Los resultados encontrados confirman la identificación macroscópica y microscópica de los aislados de F. verticillioides en medio PDA al compararlas con las descripciones de las claves taxonómicas. De los 101 aislados caracterizados morfológicamente, todos fueron identificados como F. verticillioides y de los 77 aislados caracterizados morfológicamente, cuando se aplicó la prueba de PCR se confirmó su identificación. La presencia de Fusarium verticillioides en todas las localidades indica que es un patógeno muy importante en los campos comerciales de maíz en los estados Aragua y Guárico.