Evaluación de productos antigénicos especie-específicos de Trypanosoma Vivax para su aplicación en el diagnóstico por Elisa de la tripanosomosis bovina.

Abstract

Con el propósito de lograr respuestas a los problemas de baja eficiencia de los métodos directos de diagnóstico de la tripanosomosis bovina, se planteó la evaluación de tres extractos antigénicos provenientes de aislados del estado Guárico de Trypanosoma vivax, su aplicación en la técnica de ELISA indirecto para el diagnóstico de la tripanosomosis bovina, con la determinación de los indicadores de sensibilidad, especificidad, valor predictivo, y otros indicadores. Apoyado en un estudio agropecoepidemiológico de la tripanosomosis en varios predios de ganado bovino doble propósito en 05 estados Apure, Aragua, Barinas, Cojedes y Guárico de los Llanos Centrales de Venezuela a los fines de la evaluación de los materiales antigénicos en el diagnóstico en campo. Con valores de prevalencia de 37,7% a T.vivax y seroprevalencia considerable alta por ambas metodologías (Ac-ELISA: 88,65%; IFI: 88,80%), aunque sin diferencia estadística significativa entre ambas técnicas (P<0,05). Con valores de Hto ≤ 30 ≥25%, estableciendo como anémicos aquellos animales con Hto igual o menor a 30%. El ANAVAR mostró diferencias significativas para tratamientos y épocas, pero no para la interacción tratamiento-época: Con valores de Hb ≤10 y ≥ 8,01 g/dL, estableciendo como anémicos aquellos animales con una Hb igual o menor a 10g/dL.El protocolo de Ac-ELISA homólogo empleado, con extractos solubles purificados especie-específicos de T.vivax (20g/ml) bajo el proceso de producción de calidad fue eficiente, mostrando una sensibilidad del 95% y especificidad del 96%, concordancia del 97% e índice kappa de 0,93 en base a sueros de referencia (100 positivos y 100 negativos). En tanto el ensayo con 40g/ml de antígeno especie-específico (extracto soluble purificado fraccionado), se obtuvo mejores resultados, con especificidad de 97% y sensibilidad 96% y al ser evaluados con los sueros controles, bajo las condiciones de estandarización con 100 sueros controles, 97 sueros negativos y 96 positivos coincidieron con los resultados de referencia, lo que representó 97% de concordancia con índice Kappa de 0,93. En cuanto a la repetibilidad/reproducibilidad de los ensayos, se observa que todos los valores presentaron coeficientes de variación menores al 13% establecido como estándar válido. Así mismo, en la repetibilidad del ensayo (intra ensayo) el coeficiente de variación presentó valores mucho menores (2,80 a 6,00%) que los obvervados en la reproducibilidad del ensayo (entre ensayos) cuyos valor máximo fue de 10%. En el Ac-ELISA se obtuvo puntos de corte variables, con valor mínimo de 0,209 y máximo de 0,583, con los mayores valores de densidad óptica (OD) en el caso de las réplicas con los extractos solubles purificados fraccionados de T. vivax. Los tres productos antigénicos, especie-específico de T. vivax mostraron en la Ac-ELISA y en la IFI, altos grados de sensibilidad y especificidad por lo que el método de producción de antígenos resultó eficiente para el diagnóstico de anticuerpos anti-T. vivax. La técnica de Ac-ELISA desarrollada mostró ser robusta visto los datos de repetibilidad/reproducibilidad así como los de estandarización de la misma, lo cual le otorga un valor para ser utilizada en la producción de estuches en serie industrial. Los resultados de alta prevalencia y seroprevalencia reafirman la condición endémica (enzoótica) de la tripanosomosis en la región llanera el país.