Caracterización y potencialidad de diferenciación neurogénica de células madre mesenquimales del cordón umbilical humano criopreservadas por vitrificación

Abstract

Resumen Una de las fuentes de obtención de células madre mesenquimales, son las provenientes de la gelatina de Wharton (GW) del cordón umbilical humano (CUH). Éstas presentan una serie de ventajas con respecto a las CMMs de otros tejidos; debido a su naturaleza más primitiva, son consideradas como células madre pluripotentes, lográndose diferenciar a linajes no mesenquimales como: células pulmonares, cardiomiocitos, neuronas, entre otros, con una baja incompatibilidad inmunológica. El objetivo de este trabajo fue la caracterización de las CMMs derivadas del CUH antes y después de un proceso de criopreservación por vitrificación, evaluando, además, su proliferación y potencialidad de diferenciación neurogénica in vitro. Los cultivos primarios se establecieron con una eficacia de 71,43% (n=7), mediante el método de disgregación enzimática de la GW y con una viabilidad celular de 95,77%. Los cultivos primarios y los subcultivos se caracterizaron morfológicamente, observándose principalmente dos fenotipos: células de tipo fibroblasto y células de amplio volumen citoplasmático. Estos se demostraron con la coloración de rutina May-Grunwald-Giemsa e inmunocitoquímicamente, utilizando como marcador molecular el anticuerpo monoclonal contra la proteína Vimentina, en donde, las del tipo fibroblasto presentaron una mayor intensidad en el marcaje. Las células amplificadas entre el 2do y 5to pasaje se criopreservaron por vitrificación, siendo descongelados entre 4-16 semanas, evidenciándose que estas mantuvieron sus características morfológicas, capacidad de adherencia, de proliferación, así como también su potencialidad de diferenciación neurogénica in vitro, en donde se apreciaron células similares a neuronas bipolares, multipolares y células gliales, los cuales se confirmaron por medio de la caracterización histoquímica con la tinción Violeta de Cresilo y Bielschowsky e inmunocitoquímica usando un anticuerpo en contra de neurofibrillas. Por lo tanto, se concluye que la criopreservación por vitrificación es un método eficaz, ya que permite que las células mesenquimales del cordón umbilical humano conserven su identidad morfológica y su potencialidad de diferenciación neurogénica después de la congelación. Palabras claves: células madre mesenquimales, gelatina de Wharton, cordón umbilical humano, diferenciación neural, vitrificación.