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http://hdl.handle.net/10872/12043
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| Título : | Evaluación de diferentes sistemas de cultivo sobre la producción, vitrificación y ultraestructura de blastocistos bovinos producidos in vitro |
| Autor : | Baez Contrera, Francisco José |
| Palabras clave : | Blastocistos
Bovino
PIV
Ultraestructura
Vitrificación
blastocysts
bovine
IVP
vitrification
ultrastructure |
| Fecha de publicación : | 25-Sep-2015 |
| Citación : | 2015;1425-001 |
| Resumen : | La producción de embriones bovinos se practica en todo el mundo para fines comerciales y de investigación. Una de las principales preocupaciones es el impacto de los sistemas de producción in vitro (PIV) sobre la calidad del embrión y su criotolerancia. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto de diferentes sistemas de cultivo sobre la producción y calidad antes y después de
la vitrificación de blastocistos bovinos PIV, utilizando el medio de fluido oviductal sintético modificado (mSOFaaci) suplementado con alcohol-polivinílico (PVA), albúmina sérica bovina (BSA) libre de ácidos grasos y suero fetal bovino (FCS). En el primer experimento se valoró el desarrollo, índice de apoptosis, contenido lipídico y ultraestructura de blastocistos bovinos. Para ello, se colectaron ovarios de hembras sacrificadas en matadero, los complejos cumulus-ovocito
(COC´s) fueron madurados, fecundados y luego los embriones se cultivaron in vitro en los diferentes sistemas: mSOFaaci + PVA (0,1mg/mL) desde el día 1 (D1) al día (D8), mSOFaaci + BSA (6mg/mL) desde el D1 al D8, mSOFaaci + BSA + 5% FCS desde el día 6 (D6) al D8 y mSOFaaci + BSA (6mg/mL) + 1% FCS desde el D1 al D8. Los porcentajes de blastocistos de D8,
fueron más altos (P<0,05) en el grupo de BSA (23,4%), BSA + 5% FCS (20,6%) y PVA (20%), que en BSA + 1% FCS (13,9%). El contenido lipídico, número de blastómeras e índice de apoptosis aumenta con la presencia de suero en el medio de cultivo. Los cortes semifinos y ultrafinos de los blastocistos frescos no mostraron alteraciones ultraestructurales. En el segundo experimento, los blastocistos y blastocistos expandidos PIV del grupo PVA y BSA, fueron vitrificados en fibreplug. No se observaron diferencias significativas en las tasas de re-expansión a las 2, 24 y 48 h post-vitrificación, mientras que el índice de apoptosis más bajo (14,7%; P<0,05)
correspondió al grupo de blastocistos expandidos cultivados con PVA, valorado a las 2 h después del calentamiento. A nivel ultraestructural, independientemente del estadio y sistema de cultivo (PVA o BSA), se evidenció alteración de las mitocondrias, ausencia de icrovellosidades (MV) y aparición de restos celulares en el citoplasma. En el tercer experimento, se evaluó la adición de 50 ng del factor de crecimiento epidermal (EGF) en el protocolo de calentamiento, lo que no produjo ningún efecto sobre la re-expansión y calidad de los blastocistos y blastocistos expandidos del grupo PVA, durante las primeras 24 h post-cultivo. En conclusión, el sistema de cultivo con PVA
es capaz de soportar el desarrollo de los embriones bovinos mestizos. El sistema libre de suero que se empleó para producir embriones bovinos in vitro debe seguir perfeccionándose para ser empleado en la criopreservación y cubrir los requerimientos y la demanda a gran escala |
| Descripción : | Bovine embryo production is practice worldwide for research and commercial purposes. A major concern of embryo suppliers is the impact of in vitro production (IVP) systems on embryo quality
and its cryotolerance. The aim of the current study was to evaluate the effect of different culture systems on production and quality before and after vitrification of bovine blastocysts IVP, using the modified synthetic oviduct fluid medium (mSOFaaci) supplemented with polyvinyl-alcohol (PVA), fatty acid-free bovine serum albumin (BSA) and fetal calf serum (FCS). Experiment 1 assessed the development, apoptosis index, lipid content and ultrastructure of bovine blastocysts. Ovaries were obtained from commercial abattoir. Bovine cumulus-oocyte complexes (COC´s) were matured, fertilized and were cultured in in vitro culture medium in different systems: mSOFaaci + PVA (0.1 mg/mL) from day 1 (D1) to day 8 (D8), mSOFaa + BSA (6 mg/mL) from
D1 to D8 and mSOFaa + BSA (6mg/mL) + 5% FBS from D6 to D8. The blastocysts yield at D8 was higher (P<0,05) in the BSA (23,4%), BSA + 5% FCS (20,6%) and PVA (20%), than in BSA + 1% FCS (13,9%). The lipid content, total number of cells and apoptotic index increased in the
presence of serum in in vitro culture medium. The semithin and ultrathin sections of fresh blastocysts showed normal morphology. In experiment 2, PIV early and expanded blastocyst of PVA and BSA group were vitrified in fibreplug. No significant differences in the re-expansion rates at 2, 24 y 48 hours post-culture, whereas the lowest apoptotic index (14.7%, P <0.05) corresponDE to the group of expanded blastocysts cultured with PVA, at 2 hours after thawing.
The ultrastructural lesions found, independently of stage of development and system of culture (PVA and BSA) for fibreplug-vitrified blastocysts were similar, that affect the mitochondria
structure, absence of microvilli (MV) and the appearance of cell debris at cytoplasm. In experiment 3, we evaluated the addition of 50 ng of epidermal growth factor (EGF) in the warming protocol, which no effect on the re-expansion rate and quality of early and expanded blastocysts in PVA group, during the first 24 hours post-culture. In conclusion, the culture system with PVA is capable of supporting of the crossbred embryos development. The serum-free system used in this work to produce in vitro bovine embryos should be further improved for use
in cryopreservation and meet the requirements and demand at a large-scale. |
| URI : | http://hdl.handle.net/10872/12043 |
| Aparece en las colecciones: | Doctoral
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